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超微量分光光度计原理及在核酸定量的应用说明

发布时间:2022-04-27      点击次数:206
   超微量分光光度计无须配备电脑的全波,可快速准确的检测核酸、蛋白质和细胞溶液,同时配备比色皿模式,进行细菌等培养液浓度的检测,可达到0.5ng/ul。核酸检测每次测量所需要的样品量仅需0.5-2ul即可直接将样品点于加样台上。无需比色杯或毛细管等附件。测量结束后,可以选择直接将样品擦去或者再用移液器回收样品。所有步骤简单快速,一气呵成。
  超微量分光光度计的主要原理是根据朗伯-比尔(Lamber-Beer)定律进行浓度测定的:
  A=K·C·L;
  式中:
  A为吸光度;
  K为吸(消)光系数;
  C为溶液的浓度;
  L为液层厚度。
  此公式说明在入射光一定时,溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度成正比。此式就是光的吸收定律的数学表达式,又叫朗伯-比尔定律。
  超微量分光光度计于核酸定量上的应用:
  核酸的定量是超微量分光光度计使用频率高的功能。可以定量测定溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA以及RNA含量。这是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波长在260nm,吸收波谷在230nm。
  除了核酸浓度,超微量分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
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